Лікування хронічної герпетичної інфекції вакцинами на основі ІФН-індукованих дендритних клітин

Однією з важливих проблем сучасної інфектології є хронічна рецидивуюча форма герпетичної інфекції, викликаної вірусом простого герпесу 1 і 2 типів. Від частоти рецидивів безпосередньо залежить і така характеристика як якість життя пацієнта. Разом з тим частота рецидивів 6 і більше разів на рік при всій, здавалося б «безневинність» інфекції робить істотний вплив і на загальне здоров'я пацієнта. За даними Європейського регіонального відділення ВООЗ герпетична інфекція визначена в групу захворювань, що визначають майбутнє інфекційної патології в поточному сторіччі.

Як відомо, прояви хронічної герпетичної інфекції є досить специфічними і проявляються одиничними або згрупованими бульбашковими елементами з серозним вмістом всередині (везикул), які з'являються на тлі «продроми» - свербіння і неприємних відчуттів на місці майбутніх бульбашок. Висип має свій динамічний розвиток: освіта в динаміці на місці бульбашок кірочок і подальшої гіперпігментації. Від частоти загострень хронічної інфекції залежить і форма хвороби, і якість життя пацієнта. На одне загострення в середньому йде 1-2 тижні одужання, відповідно працездатність у даний період дещо обмежена. Часто рецидивуюча форма інфекції фіксується при частоті загострень не менше 4х-6ти раз за рік, навіть якщо періоди ремісії тривають близько 2,5 місяців. При вираженому ослабленні імунітету деякі пацієнти скаржаться на частоту загострень до 15-20 разів на рік. Безумовно, таким пацієнтам повинна підбиратися індивідуальна і тривала схема терапії із застосуванням новітніх методів.

Прояви простого герпесу

Розроблені схеми терапії герпетичної інфекції включають противірусну (ацикловір, валацикловір, фамцикловір та інші) і імуномодулюючу (інтерферони, індуктори ендогенного інтерферону, імунопрепарати інших груп) терапію, що досить ефективно на певному етапі перебігу захворювання. Більшість схем терапії спрямовані на стихание самого загострення хвороби, але не спрямовані на довгостроковий ефект. Такий терапії не завжди виявляється достатньо для досягнення бажаного результату - скорочення рецидивів до мінімуму. Певною проблемою є і розвиток резистентності (стійкості) вірусів до противірусних препаратів, особливо застосовуваним безконтрольно і без призначення лікаря. У зв'язку з цим наукові розробки пішли далі. Розроблені препарати і схеми вакцинотерапии хронічної герпетичної інфекції. Але й у цих методів виявилася недостатня максимальна активність. Дійшла черга до новітніх наукових основі лікування за допомогою специфічних дентрітних клітин.

Дендритні клітини (дендроціти або ДК) відносяться до клітин імунної системи і являють собою особливий різновид лейкоцитів, що мають гіллясту структуру (dendron-дерево, грец.). Дендритні клітини мають досить великий розмір - до 15-20 мкм і розташовуються практично у всіх органах і тканинах. Дендритні клітини виконують важливу роль в імунній системі - функцію представлення антигену. Іншими словами, при попаданні мікроорганізму (віруси, бактерії, гриби та інші) в наш організм Дендритні клітини його поглинають за допомогою процесу фагоцитозу, а потім використовують його антигени для «подання» специфічним імунокомпетентним клітинам для вироблення антитіл (антиген-специфічна імунна відповідь). Дендритні клітини здатні активувати з високою силою такі імунокомпетентні клітини, як CD4 іCD8 Т-лімфоцити. Разом з тим багато наукові дослідження показали істотне зниження змісту дендритних клітин у пацієнтів з хронічними хворобами вірусної природи, що розглядається у вигляді однією з причин формування тривалої персистенції вірусів в організмі людини.

Дендроціти

Один із сучасних методів лікування хронічної рецидивуючої форми герпетичної інфекції заснований саме на презентації дендритними клітинами антигену вірусу герпесу в присутності інтерферону-альфа та інших компонентів [«Спосіб імунотерапії хронічної часто рецидивуючої герпес-вірусної інфекції» патент RU 2485962 на базі ФГБУ "Науково-дослідний інститут клінічної імунології "Сибірського відділення Російської академії медичних наук (ФГБУ" НДІКА "СО РАМН) Останін А. А., Старостіна Н. М., Черних Є.Р.].

Метою цього методу є створення дендритні-клітинних вакцин нового покоління, здатних вирішити одну просту задачу - зниження клінічних проявів герпетичної інфекції і скорочення частоти рецидивів до мінімуму з допомогою економічно вигідного способу імунотерапії хронічної рецидивуючої герпетичної інфекції. Досягнення поставленої задачі досягається шляхом генерації з моноцитів периферичної крові пацієнта аутологічних інтерферон-альфа індукованих дендритних клітин, навантажених рекомбінантним антигеном вірусу простого герпесу в культурі invitro, які хворий отримує 2ма курсами в поєднанні з препаратом рекомбінантного інтерлейкіну-2 в якості ад'юванта (препарату, що підсилює імунний відповідь). Саме за рахунок інтерлейкіну-2 йде активація Т-клітин, попереджаються процеси апоптозу (клітинної загибелі) лімфоцитів, синтезу довго живуть цитотоксичних Т-лімфоцитів.

Очікуваним результатом терапії є вироблення цілісного антиген-специфічної імунної відповіді високого рівня на тривалий період часу.

Показання до лікування

Показанням для ДК-вакцинації є хронічна герпетична інфекція, часто рецидивуюча форма при частоті рецидивів більше 6 разів на рік, причому з моменту останнього рецидиву повинно пройти не менше 2х тижнів (тобто в період ремісії).

Як проводиться лікування дендритними клітинами

Технічне виконання методу полягає в наступному: пацієнт госпіталізується в стаціонар, де проводиться генерація дендроклеток з периферичної крові хворого. У ранкові години відбирається 200 мл крові у флакон з гепарином (1000 Од), до якої додається розчин желатиноля (40 мл) і проводиться інкубація при 370 протягом 45 хвилин. Утворюється лейкоцитарна суспензія, яку центрифугують протягом 20 хвилин при 1000 об / хв. Обложені клітини омивають фосфат-забуферним фізіологічним розчином (PBS), напластовують на градієнт щільності фіккола-верографина і знову ж центрифугують 20 хвилин, але вже при 3000 об / хв. Зібрані мононуклеарние клітини (МНК) піддаються додатковій обробці (двічі омиваються, ресуспендіруєтся) до виділення МНК в концентрації 3 * 106 / мл, які інкубують при 370 протягом 2х годин (це незрелиедендроклеткі). У подальшому клітини проходять знову додаткову обробку, навантаження інтерфероном-альфа +1000 Од / мл (Роферон-А, Roche, Швецария), повторну культивацію протягом 3х годин. Потім у присутності препарату полиоксидоний (НУО ПетроваксФарм, Росія) в дозі 2 нг / мл і відбувається остаточне дозрівання дентрітних клітин.

Генерація ДК-клітин

Таким способом і виходять ІФН-ДК (інтерферон індуковані дендритні клітини), які в подальшому навантажують самим специфічним рекомбінантним (штучно створеним в лабораторних умовах) антигеном вірусу простого герпесу (HSV 1 gD, НВО «Діагностичні системи» Нижній Новгород) в дозуванні 5 мкг / мл при інкубації протягом 1:00 при 370.

Отриманий препарат (специфічні ІФН-ДК) в концентрації 6,0 * 106 / мл кріоконсервіруют для подальшого використання. Весь процес виготовлення триває 4 доби.

Методика ДК-вакцинації

Методика ДК-вакцинації із застосуванням даного препарату полягає їх 2х курсів вакцинотерапии:

1) «індукторні курс» включає 4-6 підшкірних ін'єкцій у верхню третину плеча в дозі 5,0 * 106 / мл з інтервалами в 2 тижні. Вакцинації проводяться на тлі одночасного введення інтерлейкіну-2 - препарату «Ронколейкін ®» (ТОВ «Біотех», Санкт-Петербург) в дозі 0,25 мг, який вводиться підшкірно в якості ад'юванта.

Ін'єкції

2) «Підтримуючий курс» складається з 3-6 підшкірних ін'єкцій ІФН-ДК в дозі 5 * 106 мл з періодичністю 1 раз на місяць також одночасно з ад'ювантом.

Контроль ефективності ДК-вакцинації проводять шляхом визначення рівня проліферативної відповіді МНК на стимуляцію вакцинальним антигеном вірусу герпесу (HSV 1gD) і митогеном (конканавалін А). У пацієнта забирається 10 мл венозної крові, яка піддається обробці і протягом 72 годин оцінюється рівень проліферації та інші складові дослідження. Результат надається у вигляді середнього рахунку (імп / хв) їх трьох ідентичних культур. Контроль проводиться 4 рази: до лікування, після 1 курсу, після 2 курсу і через 6 місяців після закінчення терапії (останнє дослідження через 15 місяців після початку лікування).

Пргноз лікування

Використання даного методу ДК-вакцинації із застосуванням ІФН-ДК вакцин виявив 75% ную ефективність у пацієнтів з часто рецидивуючою формою герпетичної інфекції. Так, частота рецидивів у пацієнтів знижувалася в 3 рази, причому скорочувалася і загальна площа уражень при загостренні, тривалість ремісії (межрецідівного періодів) удлінняют до 3х і більше місяців. Також відзначалося поліпшення показників специфічного антиген-індукованого імунної відповіді як після другого курсу вакцинації, так і через 6 місяців після закінчення лікування.

Таким чином, можна говорити про появу нового ефективного методу ДК-вакцинації, здатного стимулювати вироблення антиген-специфічної імунної відповіді не тільки в період вакцинотерапии, але і через 6 місяців після завершення лікування, що безумовно вплине на частоту рецидивів при даної хвороби і якість життя пацієнтів з хронічною часто рецидивуючої герпетичної інфекцією.

Лікар інфекціоніст Бикова Н.І.